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StarLighter HP SYBR Green qPCR Mix (Universal)

发布日期:2022-08-31 返回列表

StarLighter HP SYBR Green qPCR Mix (Universal) 

(StarLighter 高性能染料法 qPCR 预混液—通用型)

 

货号

产品名称

规格

价格(元)

FS-Q1005

StarLighter HP SYBR Green qPCR Mix (Universal)

500rxn×20μl (5 ml)

1200

FS-Q1006

StarLighter HP SYBR Green qPCR Mix (Universal)

1000rxn×20μl (10 ml)

2200

 

产品简述:

StarLighter HP SYBR Green qPCR Mix是一款含基因工程酶的qPCR试剂。该基因工程酶可耐受高浓度的SYBR Green I染料,反应体系中加入足够多的SYBR Green I 染料,能够降低荧光信号达到阈值的循环数(Ct值),提高信噪比、线性和灵敏度。StarLighter HP SYBR Green qPCR Mix扩增特异性强,能有效减少非特异性扩增,数据结果更加可靠。产品能有效扩增复杂模板,能有效应对高GC或高AT的目的片段。同时抗抑制剂干扰能力强。

 

主要应用:

基因表达分析;

低拷贝数基因检测;

基因敲除验证;

基因表达验证;

RNA拷贝数检测(病毒及病菌等检测)。

 

技术特点:

扩增特异性强,数据结果可靠;

反应效率高,Ct值提前;

信噪比高,灵敏度高;

GC或高AT的片段扩增效果好;

耐受抑制剂能力强。

 

优异表现:

(1)扩增特异性强,数据结果可靠

与众多国内外品牌qPCR Mix相比,启衡星 HP SYBR Green qPCR Mix表现出超好的性能。

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Fig.1 不同试剂的 qPCR 结果准确性比较。以人的 cDNA为模板,使用同厂家试剂,扩增长度为 219 bp 的片段,GC%=64% (TR基因)。分别得到 StarLighter HP SYBR Green qPCR Mix与各品牌的扩增和熔解曲线图;SL—StarLighter HP SYBR Green qPCR Mix,使用此试剂得到非常完美的扩增 曲线,荧光信号强,溶解曲线及电泳条带单一 、准确。

(2)扩增效率高,线性范围好, 低拷贝检测灵敏度高

图片3.jpg

Fig.2    不同试剂对连续梯度稀释模板的定量结果比较。以 KAPA  Ion  Torrent  Library Quantification Kit 中浓度为 8.3 pM 的标准品作为 S1,依次 5 倍稀释得到 (S2-S10) 为模 板,分别用 StarLighter HP SYBR Green qPCR Mix 与供应商 KP 进行 qPCR 定量获得的扩 增曲线及熔解图。StarLighter HP SYBR Green qPCR Mix,从S1-S10 扩增效率 (Eff=l00.483%) 好,扩增曲线完美, 荧光信号强,溶解曲线单一。


(3)荧光信号强,灵敏度高


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Fig.3  不同试剂扩增曲线的荧光强度比较。 使用同样模板和引物,使用市面 上各品牌的 qPCR 试剂得到扩增曲线图,上图为去掉 ROX 后的各品牌的荧 光信号值比较,供应商 KP StarLighter HP SYBR Green qPCR Mix 荧光信号强度最高。


(4)Ct 值出现更早

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Fig.4 不同试剂qPCR结果的Ct值比较。 以人DNA为模板,使用不同厂家试剂,扩增长度为219 bp的片段,GC%=64% (TR基因); 在产物经电泳 验证为目的片段的前提下,扩增曲线去掉Rox校正后,StarLighter HP SYBR Green qPCR Mix Ct值最小,灵敏度最高。


(5)高GC或高AT的片段扩增效果好

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Fig.5 不同试剂定量高AT片段的结果比较。以人的DNA为模板,使用不同厂家试剂,扩增长度为198 bp的片段, AT%=64.4% (hPRTl基因); 从扩增效率上看,StarLighter HP SYBR Green qPCR Mix,Eff=l00.868%为最优;友商TY3,Eff=94.630%;友商KP,Eff=98.334%。

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Fig.6 不同试剂定量高GC片段的结果比较。以人的DNA为模板,使用不同厂家试剂,扩增长度为322 bp的片段,GC%=75.5% (ApoE基因); 从扩增效率上看,StarLighter HP SYBR Green qPCR Mix,Eff=101.307%为最优; 友商TY3,Eff=150.097%;友商RC,Eff= NA(最高浓度无扩 增)。

(6)耐受抑制剂能力强


图片8.jpg

Fig.7  不同试剂定量含抑制剂模板的结果比较。以人的 DNA 为模 板,使用不同厂家试剂,扩增长度为 393 bp 的片段,GC%=35.6% (F8-exon  10 基因);以天根磁珠法血液基因组提取试剂盒提取的 DNA 为模板,原始模板浓度为 100 ng/µL,作为 S1,之后依次使 用同样稀释液按梯度稀释10倍分别得到 S2、S3、S4。从扩增效率 看,StarLighter HP SYBR Green qPCR Mix,Eff=94.365% 为最优;供 应商 KP,Eff=NA(最高浓度无扩增)。StarLighter HP SYBR Green qPCR Mix 扩增效率符合要求,供应商 KP 的 S1 模板未扩增。


(7)试剂稳定易保存

    

     4℃保存稳定性

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     常温与37°C保存稳定性

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      反复冻融

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Fig.8 StarLighter HP SYBR Green qPCR Mix稳定性测试的结果展示。 图A:试剂4℃保存至39天; 图B :试剂室温保存至8天; 图C :试剂31℃保存至 8天;图D:试剂反复冻融至35次;以人的DNA为模板,扩增长度为123 bp的片段(UBC基因),GC%=52%,未见明显信号强度降低和Ct值延迟。


Primer

 

竞品

ApoE(人,DNAamplicon length=322bp, GC%=75%

TR(人,DNAamplicon

 length=219bp, GC%=64.0%

UBC(人,cDNAamplicon length=123bp, GC%=52.0%

特异产物

扩增效率

特异产物

扩增效率

特异产物

扩增效率

TG

149.631%

96.795%



TK





102.101%

VZ



97.196%



AB





98.789%

TY3



98.028%

110.361%

KA



108.63%



SL

105.049%

95.998%

100.374%

YS





99.905%

CW







BR





95.611%

RC



92.762%

97.752%

TY1





96.83%

 

定量反应(体系、程序参数)

1)推荐反应体系

组分

 10 µl /rxn

 20 µl /rxn

终浓度

H2OPCR级)

补至10µl

补至20µl

 N/A

2× HP SYBR Green qPCR  Mix

5μl

10μl

1x

10 µM 正向引物  

 0.3 μl

 0.6 μl

300 nM  

10 µM 反向引物  

 0.3 μl

 0.6 μl

300 nM  

cDNA模板

(<50ng/μl

(<50ng/μl

根据需要

RoX

0.2μl

0.4μl

50/500nM(根据仪器需要)

 2)推荐反应程序

步骤

温度

时间

循环

酶激活

95℃

5 min

1

变性

95℃

30 sec

40 cycles

退火/延伸 数据采集

60℃

≥20 sec(根据仪器和扩增产物长度;若采用三步法,20sec退火后,72℃延伸1sec

熔解曲线

根据仪器要求

 

说明书附件下载:




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